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ZsGreen和T-Sapphire綠色熒光蛋白
天然綠色熒光蛋白產(chǎn)生熒光并且穩(wěn)定,但激發(fā)光接近紫外線范圍。由于紫外線需要特殊的光學(xué)考慮,并且會(huì)損壞活細(xì)胞,不適合用光學(xué)顯微鏡對(duì)活細(xì)胞成像。通過將改變65位單點(diǎn)突變引入殘基(S65T),綠色熒光蛋白的大激發(fā)光很容易轉(zhuǎn)移到488納米(在青色區(qū)域)。這種突變是綠色熒光蛋白流行的變體,稱為增強(qiáng)的GFP(EGFP),可通過BD Biosciences Clontech提供的多種載體在市場(chǎng)上買到。此外,可以使用為熒光素設(shè)計(jì)的常用濾光片對(duì)增強(qiáng)版進(jìn)行成像,并且該濾光片是當(dāng)前可用熒光蛋白中亮的。使用EGFP的缺點(diǎn)是對(duì)pH值敏感,并且二聚化趨勢(shì)較弱。
GFP 或其變體的光譜特性在于構(gòu)成發(fā)色團(tuán)的結(jié)構(gòu)通常是在第 65–67 位上,或著是靠近該位置的殘基(例如,YFP)。除了關(guān)于發(fā)色團(tuán)的主要突變以外,科學(xué)家還對(duì)其他基因位點(diǎn)定點(diǎn)誘變,以改善它們?cè)诋愒葱约?xì)胞系中的一些性能,包括蛋白的成熟和表達(dá)等其他因素。
Sapphire是GFP突變體,它表現(xiàn)出大的斯托克斯位移(Stokes shift)。接近發(fā)色團(tuán)位置上的突變區(qū)域(T203I)使其激發(fā)峰和發(fā)射峰分別變成了399 nm 和511 nm。Sapphire 表現(xiàn)出112 nm的斯托克斯位移。Emerald 是另一種 GFP 修飾,其光穩(wěn)定性和亮度都經(jīng)過了改善,且它在哺乳類細(xì)胞中可以更高效地進(jìn)行蛋白折疊。
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以上資料來自小編MSQ,2023.09.27
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