產(chǎn)品優(yōu)勢：
1.產(chǎn)品僅用于科研隨時(shí)可用。
2.優(yōu)化的緩沖液可增強(qiáng)特異性并減少引物二聚體的形成。
3.高靈敏度，特異性和可靠性。
4.為不同的qPCR儀器提供了被動參考染料。

儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

使用方法:
一、稀釋 PCR 陽性對照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的 DN段作為陽性對照。
2. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險(xiǎn)有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。

LAYN Others Human 人 Layilin 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 硫酸鈣(>99%,BR)質(zhì)量規(guī)格：>99%,BRCalcium sulfate, anhydrous

CM-H084人臍靜脈平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL二環(huán)己基碳二亞胺(>99%,BR)質(zhì)量規(guī)格：>99%,BRDCC, Dicyclohexylcarbodiimide

SERPINI1 Others Mouse 小鼠 SerpinI1 / Neuroserpin 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 丁二酸二甲酯(>99%,BR)質(zhì)量規(guī)格：>99%,BRDimethyl succinate

小鼠角膜上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL二甲基甲酮鈉鹽(>97%,BR)質(zhì)量規(guī)格：>97%,BRDimethylglyoxime  salt

L6565小鼠白血病克隆細(xì)胞系 L6565 murine leukemia cell line RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS直接藍(lán)71(≥50%,BR)質(zhì)量規(guī)格：≥50%,BRDirect blue 71

軟骨細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)N-苯甲酰-2'-脫氧胞苷質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRbz-dC

MAP3K8 Others Human 人 TPL2 / MAP3K8 / MEKK8 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) N6-苯甲酰-2'-脫氧腺苷質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRbz-dA

KM小鼠子瘤株;U145'-O-三苯甲基尿苷質(zhì)量規(guī)格：>97%,BRTrt-rU

NIH/3T3細(xì)胞，胚胎成纖維細(xì)胞 人高轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞,LM3細(xì)胞 CL-0104HEp-2(人喉表皮樣癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2Trt-dU質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRTrt-dU

敘利亞倉鼠腎細(xì)胞;BHK-21N2-洛沙坦-洛沙坦(洛沙坦雜質(zhì))質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口N2-Losartanyl-losartan (Losartan Impurity)

SV40轉(zhuǎn)化的非洲綠猴腎細(xì)胞;COS-1 膀胱變移細(xì)胞癌，T-24細(xì)胞 U251(膠質(zhì)瘤細(xì)胞)Murexide基紫色酸1克BS

EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細(xì)胞;KMY09275,5`-二流雙(2-肖基本加醋) 3-Ccrboxy-4-nitnophqnyl disulfidq 69-78-3

EFNB2 Others Mouse 小鼠 EFNB2 / EphrinB2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) Manganesechloride錄化亞錳5克BR，99%

CM-R101大鼠腦動脈血管平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基100mLBT四唑藍(lán)500毫克超，50mg/ml，有害品

HEXB Others Human 人 Hexosaminidase B / HEXB 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 302-84-1DL-絲酸;DL-蠶絲基酸;DL-2-基-3-羥基酸;DL-β-羥基酸DL-Serine;DL-2-AMino-3-xy7noxypropionic acid;DL-β-xy7noxyalanine;(±)-2-AMino-3-xy7noxypropionic acid; DL-3-xy7noxy-α-alanine

人整合SV40基因的上皮細(xì)胞;HBL-100 [HBL100]鈮標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml)Niobium standard質(zhì)量規(guī)格：1000μg/ml

DNASE1 Others Human 人 DNASE1 / Deoxyribonuclease I / DNL1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 鎳標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/mL，基體:1%HNO3)Nickel Standard質(zhì)量規(guī)格：100μg/mL，基體:1%HNO3

CL-0384MDA-MB-468-06(人癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液(500mg/L,溶劑：水)Potassium standard質(zhì)量規(guī)格：500mg/L,溶劑：水

Mv1Lu細(xì)胞，貂肺上皮細(xì)胞 人紅白細(xì)胞白血病細(xì)胞,HEL細(xì)胞 人皮膚成纖維細(xì)胞;HSAS4鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000µg/mL,基體:1%HCl) Potassium Solution質(zhì)量規(guī)格：1000µg/mL,基體:1%HCl

鯉魚尾鰭細(xì)胞;YZ16鐠標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml)Praseodymium standard質(zhì)量規(guī)格：1000μg/ml

PCR實(shí)驗(yàn)步驟：

①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀?；靹蚝?，4℃下7000rpm離心5分鐘。
轉(zhuǎn)基因元件NtQPT1啟動子LAMP試劑盒⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。