50次 轉(zhuǎn)基因元件RuBiSCo啟動(dòng)子LAMP試劑盒
- 公司名稱(chēng) 上海谷研實(shí)業(yè)有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號(hào) 50次
- 產(chǎn)地 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷(xiāo)商
- 更新時(shí)間 2020/8/5 10:57:29
- 訪問(wèn)次數(shù) 1282
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CAS | 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū) | 純度 | 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū) |
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分子量 | 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū) | 分子式 | 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū) |
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50次 |
貨號(hào) | GOYP63870 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 |
主要用途 | 公司產(chǎn)品僅用于科研 |
儲(chǔ)存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 轉(zhuǎn)基因元件RuBiSCo啟動(dòng)子LAMP試劑盒 |
英文名稱(chēng) | Lamp kit for transgenic element Rubisco promoter |
規(guī)格 | 50次 |
產(chǎn)品優(yōu)勢(shì):
1.隨時(shí)可用。
2.優(yōu)化的緩沖液可增強(qiáng)特異性并減少引物二聚體的形成。
3.高靈敏度,特異性和可靠性。
4.為不同的qPCR儀器提供了被動(dòng)參考染料。
使用方法:
一、稀釋 PCR 陽(yáng)性對(duì)照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)產(chǎn)品僅用于科研
1. 注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照,只提供可以直接使用的 DN段作為陽(yáng)性對(duì)照。
2. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
6. 換槍頭,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿(mǎn)意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi),并且要充分混勻。
PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
①取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無(wú)色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見(jiàn)的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝螅?℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。
L5178Y TK+/- clone (3.7.2C)小鼠瘤細(xì)胞 L5178Y TK+/- clone (3.7.2C) in mouse lymphoma cells DMEM培養(yǎng)基+10%FBS鹽酸左旋咪唑(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:UV法含量測(cè)定Levamisole HCl
IL17A Protein Marmoset 重組絨猴 IL17 / IL17A 蛋白米帕明/丙咪嗪質(zhì)量規(guī)格:>99%,BRClomipramine HCL
人腦膜細(xì)胞 (HMC)( 5×105 ) 細(xì)胞名稱(chēng) NCI-N87 [N87]人胃癌細(xì)胞咪唑司汀質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BRMizolastine
CM-R009大鼠肺大靜脈平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL嗎替麥考酚酯/霉酚酸酯質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)Mycophenolate Mofetil
CD3D & CD3E Others Cynomolgus 食蟹猴 CD3D & CD3E Heterodimer 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 嗎替麥考酚酯/霉酚酸酯(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品Mycophenolate Mofetil
CHO, 中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞系普羅布考質(zhì)量規(guī)格:>99%Probucol
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細(xì)胞;KM933 人髂動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL普羅布考(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:含量測(cè)定Probucol
胎牛血清FBSIpatasertib(GDC0068)質(zhì)量規(guī)格:>98%,高選擇性的pan-Akt抑制劑GDC-0068;RG7440
IL21R Others Rat 大鼠 IL-21R / Ierleukin-21 Receptor 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) L-天冬氨酸鎂質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRL-Aspartic acid Mg salt
人脈絡(luò)膜微血管細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL苯并-15-冠5-(>98.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)Benzo-15-crown 5-Ether
LRP10 Others Human 人 LRP10 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) N-Acetyl-D-tryptophanD-α-N-乙?;?/span>-β-吲哚酸25克BR,98%
小鼠真皮成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL3-錄-1-炳流醇 98% 3-CHLORO-1-PROPcNqTHIOL 17481-19-2
HN13口腔鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞 HN13 oral squamous cell carcinoma cells DMEM+10%FBSMerrifieldresin錄甲基樹(shù)脂10克BR
IL23 Protein Human 重組人 IL-23 (IL23A & IL12B Heterodimer) 蛋白Calceindiwo7iumsalt鈣黃綠素鈉鹽25克IND
UM-UC-3(人膀胱移行細(xì)胞癌) 5×106cells/瓶×2 HUM, 正常人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞321-30-2腺嘌呤鹽;腺素;6-基嘌呤鹽Adenine sulfate
CXCL13 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CXCL13 / BCA-1 / BLC 蛋白 (His 標(biāo)簽)尼美舒利Nimesulide質(zhì)量規(guī)格:>99%
Sf-21(昆蟲(chóng)細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 人 ENPEP / Aminopeptidase A 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 硝酸咪康唑Miconazole Nitrate質(zhì)量規(guī)格:>99%
轉(zhuǎn)基因元件RuBiSCo啟動(dòng)子LAMP試劑盒人整合SV40基因的上皮細(xì)胞;HBL-100 [HBL100]硝酸咪康唑(標(biāo)準(zhǔn)品)Miconazole Nitrate質(zhì)量規(guī)格:>99%,標(biāo)準(zhǔn)品
ACVR1C Others Cynomolgus 食蟹猴 ALK-7 / ALK7 / ACVR1C 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 硫酸小諾霉素/硫酸小諾米星/硫酸沙加霉素Micronomicin Sulfate質(zhì)量規(guī)格:含量≥590 µg/mg
人臍血間質(zhì)干細(xì)胞 Human umbilical cord blood mesenchymal stem cells小諾霉素(標(biāo)準(zhǔn)品)Micronomicin Sulfate質(zhì)量規(guī)格:效價(jià)測(cè)定
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