10923 通用型一步法無縫克隆試劑盒(用于同源重組)
- 公司名稱 翌圣生物科技（上海）股份有限公司
- 品牌Yeasen/翌圣生物
- 型號10923
- 所在地上海市
- 廠商性質(zhì)生產(chǎn)廠家
- 更新時間2024/9/4 17:14:18
- 訪問次數(shù) 345
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企業(yè)簡介
翌圣生物科技（上海）股份有限公司【Yeasen Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd.】是一家以蛋白質(zhì)改造和酶進(jìn)化技術(shù)為驅(qū)動，聚焦生命科學(xué)產(chǎn)業(yè)鏈上游核心原料，從事分子、蛋白和細(xì)胞三大品類生物試劑的研發(fā)、生產(chǎn)與銷售的高新技術(shù)企業(yè)，通過打通分子酶、蛋白、抗體、核酸、細(xì)胞的技術(shù)開發(fā)路徑，成為國內(nèi)少數(shù)同時覆蓋三大品類生物試劑、兼?zhèn)浜诵募夹g(shù)自主研發(fā)能力和規(guī)?；a(chǎn)能力的高新技術(shù)企業(yè)，產(chǎn)品廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)研究領(lǐng)域、診斷與檢測領(lǐng)域和生物醫(yī)藥領(lǐng)域。
主營業(yè)務(wù)
公司憑借在蛋白質(zhì)改造和酶進(jìn)化領(lǐng)域的技術(shù)優(yōu)勢和深耕生物試劑行業(yè)多年積累的豐富經(jīng)驗，構(gòu)建了品質(zhì)優(yōu)良、類型齊全、種類豐富的產(chǎn)品管線。自公司成立以來，公司研發(fā)、生產(chǎn)和銷售的生物試劑超過3000種，涵蓋分子、蛋白、細(xì)胞三大品類的生物試劑，能夠滿足客戶多種類型生物試劑的一體化采購需求。公司核心產(chǎn)品覆蓋qPCR系列、NGS系列、逆轉(zhuǎn)錄系列、核酸提取與純化系列、PCR系列、分子克隆系列、體外轉(zhuǎn)錄系列、抗體、蛋白純化系列、蛋白分析系列、重組蛋白、細(xì)胞分析系列、細(xì)胞培養(yǎng)系列、細(xì)胞轉(zhuǎn)染系列、報告基因檢測系列等多個品類的生物試劑，廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)研究、診斷檢測和生物醫(yī)藥等領(lǐng)域。
發(fā)展歷程
榮譽(yù)資質(zhì)
翌圣生物通過申請商標(biāo)和軟件著作權(quán)的方式保障核心技術(shù)和市場競爭力，不斷加強(qiáng)公司品牌建設(shè)。截至2022年3月31日，公司已經(jīng)獲得授權(quán)18項（其中發(fā)明14項、實用新型1項、外觀設(shè)計3項）和45項與生物試劑相關(guān)的軟件著作權(quán)，擁有經(jīng)國家知識產(chǎn)權(quán)局商標(biāo)局核準(zhǔn)的注冊商標(biāo)權(quán)37項以及4項境外注冊商標(biāo)，是國家高新技術(shù)企業(yè)和上海市專精特新企業(yè)。
創(chuàng)新平臺
經(jīng)過多年的產(chǎn)品研發(fā)技術(shù)經(jīng)驗的沉淀以及持續(xù)的研發(fā)創(chuàng)新，翌圣生物積極開展“產(chǎn)學(xué)研”合作，與擁有生物催化與酶領(lǐng)域國家重點實驗室的湖北大學(xué)、擁有教育部工業(yè)生物領(lǐng)域重點研究基地的江南大學(xué)展開合作，優(yōu)化生物試劑關(guān)鍵原料的生產(chǎn)和表達(dá)工藝。翌圣生物以基因工程技術(shù)、生物信息技術(shù)、細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)、免疫學(xué)技術(shù)、生化分析技術(shù)等生命科學(xué)領(lǐng)域的共性生物技術(shù)為基礎(chǔ)，建立了六大核心技術(shù)平臺——雙向分子酶理性設(shè)計與定向進(jìn)化平臺、密度發(fā)酵與超潔凈純化平臺、分子診斷試劑關(guān)鍵原料研發(fā)平臺、高通量測序建庫試劑創(chuàng)新研發(fā)平臺、高性能單克隆抗體研發(fā)平臺和mRNA醫(yī)藥應(yīng)用研發(fā)平臺，目前已經(jīng)自主研發(fā)出20項核心技術(shù)，打通分子酶、蛋白、抗體、核酸、細(xì)胞的技術(shù)開發(fā)路徑，覆蓋技術(shù)研發(fā)、產(chǎn)品升級、規(guī)模生產(chǎn)和質(zhì)量控制等生物試劑研發(fā)和生產(chǎn)的各關(guān)鍵環(huán)節(jié)。
工業(yè)化生產(chǎn)
翌圣生物擁有按照準(zhǔn)GMP 標(biāo)準(zhǔn)建設(shè)運(yùn)營的工業(yè)化生產(chǎn)基地，配有噸級發(fā)酵線、工業(yè)級 AKTA 純化線和全自動包裝線。同時，公司通過了ISO 13485:2016質(zhì)量管理體系認(rèn)證，從原料控制、生產(chǎn)管理、質(zhì)檢管控、倉儲運(yùn)輸?shù)葘ιa(chǎn)線進(jìn)行360度管理監(jiān)督，保證產(chǎn)品過程的可控制性及可追溯性，竭盡全力為您提供可靠的產(chǎn)品。
客戶服務(wù)
翌圣生物憑借優(yōu)質(zhì)穩(wěn)定的產(chǎn)品質(zhì)量、高效及時的響應(yīng)能力、快速穩(wěn)定的交付能力和周到完備的售后服務(wù)獲得了眾多科研用戶和工業(yè)用戶的認(rèn)可，為檢測公司、治療公司、工具類公司和科學(xué)研究實驗室提供應(yīng)用于科學(xué)研究、體外診斷、基因測序、生物醫(yī)藥等的生物試劑。與中國科學(xué)院、清華大學(xué)、北京大學(xué)、復(fù)旦大學(xué)、上海交通大學(xué)、浙江大學(xué)等頂尖科研院所和華大基因、恒瑞醫(yī)藥、藥明康德、之江生物、圣湘生物、斯微生物、金斯瑞、思路迪等工業(yè)客戶建立了穩(wěn)定、緊密的合作關(guān)系，公司產(chǎn)品被多次使用在Nature、Science、Cell等國際頂級期刊論文發(fā)表中。
公司企業(yè)文化
幫助客戶創(chuàng)造價值，讓世界更健康更快樂
◎ 成為生命科學(xué)工具領(lǐng)域全球Top⑩
◎ 具備驅(qū)動產(chǎn)業(yè)變革的技術(shù)創(chuàng)新能力
◎ 擁有一支持續(xù)學(xué)習(xí)型的翌圣鐵軍
翌圣生物始終秉承“幫助客戶創(chuàng)造價值，讓世界更健康更快樂”的使命，專注于技術(shù)創(chuàng)新和產(chǎn)品升級，不斷拓展核心技術(shù)的應(yīng)用領(lǐng)域，為客戶提供更為的產(chǎn)品與服務(wù)，助力我國打造自主可控的生物試劑產(chǎn)業(yè)鏈。同時，翌圣生物將進(jìn)一步推進(jìn)國際化戰(zhàn)略，繼續(xù)布局和拓展海外市場，為全球生物試劑產(chǎn)業(yè)發(fā)展貢獻(xiàn)力量。
分子生物學(xué)試劑，細(xì)胞生物學(xué)試劑，免疫學(xué)試劑，蛋白組學(xué)試劑等
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè) |
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通用型一步法無縫克隆試劑盒(用于同源重組)Hieff Clone® Universal II One Step Cloning Kit是新一代的同源重組克隆試劑盒，精心優(yōu)化的第二代2× Hieff Clone® Universal II Enzyme Premix預(yù)混了重組酶和重組反應(yīng)所需緩沖液，并添加了的重組增強(qiáng)因子，用于同源重組可顯著提高重組克隆效率。
該試劑盒可以將PCR產(chǎn)物定向克隆至任何載體的任何位點，兼容未純化PCR產(chǎn)物、直接回收的PCR產(chǎn)物、低濃度的膠回收產(chǎn)物，本產(chǎn)品可重組同源臂GC含量30%-70%的接頭片段。將載體線性化，并在插入片段正、反向PCR引物5’端引入15-25 bp的線性化載體末端同源序列，使得插入片段PCR產(chǎn)物5’和3’末端分別帶有與線性化載體兩末端對應(yīng)的一致的序列。PCR產(chǎn)物和線性化載體在重組酶的作用下，在50℃條件下最快僅需5 min即可完成重組反應(yīng)?？寺￡栃月士蛇_(dá)95%以上。
組分信息
組分編號 | 組分名稱 | 10923ES05 | 10923ES20 | 10923ES50 |
10923-A | 2 × Hieff Clone® Universal II Enzyme Premix | 50 μL | 200 μL | 500 μL |
10923-B | 500 bp control insert (25 ng/μL) | 5 μL | 5 μL | 5 μL |
10923-C | pUC 19 control vector, linearized (50 ng/μL) | 5 μL | 5 μL | 5 μL |
儲存條件
-25~-15℃保存，有效期1年。
簡版使用說明
1.重組反應(yīng)
1)線性化載體和插入片段使用量
Hieff Clone®重組反應(yīng)體系各個片段及載體插入總濃度為0.02 - 1 pmol。載體與各個插入片段摩爾比為1:2*。對應(yīng)的DNA質(zhì)量可由以下公式計算獲得：
pmol = (插入片段使用量ng) × 1,000 / (插入堿基對數(shù) × 650 daltons)
50 ng 5,000 bp的DNA片段約為0.015 pmol
50 ng 500 bp的DNA片段約為0.15 pmol
*當(dāng)插入片段長度大于載體時，最適載體與插入片段使用量的計算方式應(yīng)互換，即插入片段當(dāng)做載體，載體當(dāng)做插入片段進(jìn)行計算。線性化載體及插入片段的反應(yīng)終濃度可達(dá)到1 ng/μL。線性化載體和插入片段擴(kuò)增產(chǎn)物未純化直接使用時，使用總體積應(yīng)不超過反應(yīng)體系體積的1/5，如20 μL體系不超過4 μL。
簡便的投入量計算公式：插入片段投入量=2×插入片段長度×插入載體投入質(zhì)量/載體長度
2)重組反應(yīng)體系（可等比擴(kuò)大或縮減反應(yīng)體系，冰上配制，各組分使用前需混勻）
組分 | 重組反應(yīng)體系 |
2× Hieff Clone® Universal II Enzyme Premix | 10 μL |
每個插入片段投入量 | X |
目的載體投入量 | Y |
ddH2O | To 20 μL |
表1 反應(yīng)體系
3)重組反應(yīng)條件
體系配制完成后，用移液器輕輕吸打混勻各組分，短暫離心將反應(yīng)液收集至管底。
當(dāng)插入1個片段時，反應(yīng)條件為50℃，5 min；當(dāng)插入片段數(shù)為2-6個時，建議反應(yīng)條件為50℃，10 -50 min（反應(yīng)時間隨片段數(shù)增多而延長，如表2所示）。超長載體片段連接，建議反應(yīng)時間為40-60 min。
連接片段數(shù) | 重組反應(yīng)時間 |
2 | 10 min |
3 | 20 min |
4 | 30 min |
5 | 40 min |
6 | 50 min |
表2 反應(yīng)時間
反應(yīng)產(chǎn)物可直接進(jìn)行轉(zhuǎn)化，也可儲存于-20℃，待需要時解凍轉(zhuǎn)化。
轉(zhuǎn)化
提前15分鐘將用到的篩選培養(yǎng)基平板拿到37℃預(yù)熱。
在冰上解凍快速克隆感受態(tài)細(xì)胞（如：DH5α Fast Chemically Competent Cell，Cat#11803ES）。
取10 μL冷卻重組產(chǎn)物，加入到100 μL感受態(tài)細(xì)胞中，輕彈管壁數(shù)下混勻，在冰上放置5 min。
用200 μL移液槍將上一步的混合物轉(zhuǎn)移到已經(jīng)37℃預(yù)熱的LB培養(yǎng)基上，均勻涂布。
將平板置于37℃培養(yǎng)箱倒置過夜培養(yǎng)。若進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，平板在37℃至少倒置培養(yǎng)15 h。
克隆鑒定
快捷的方法是菌落PCR。用無菌的槍頭或牙簽將單個菌落挑至菌落PCR Mix中混勻（如：2×Hieff® Ultra-Rapid HotStart PCR Master Mix (with Dye)，Cat#10157ES），加入引物直接進(jìn)行PCR反應(yīng)。推薦至少使用一條通用測序引物進(jìn)行菌落PCR，可以避免PCR假陽性的產(chǎn)生。后續(xù)也可用于酶切或測序鑒定。
注意事項
1.需自備的材料：
1)自備樣品：自備好線性化載體和插入片段。
2)自備試劑（僅羅列部分）：
超級感受態(tài)：轉(zhuǎn)化效率＞108 cfu/μg，如翌圣DH5α快速化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞（Cat#11803ES）。
高保真酶：2× Hieff Canace® AdvanceFast PCR Master Mix (With Dye)（Cat#10164ES）或其他等效產(chǎn)品。
菌落PCR mix：2× Hieff® Ultra-Rapid HotStart PCR Master Mix (with Dye)（Cat#10157ES）或其他等效產(chǎn)品。
核酸染料：YeaRed Nucleic Acid Gel Stain (10,000× in Water)（Cat#10202ES）或其他等效產(chǎn)品。
3）自備儀器耗材（僅羅列部分）：PCR儀，水平電泳槽，切膠儀，EP管等。
2. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
3. 本產(chǎn)品僅作科研用途！
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