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有時候，qPCR實驗會成為阻礙你課題順利開展的強勢攔路虎！看似簡單的基因表達量差異驗證，當遇到低豐富表達的基因時，也許就舉步維艱。模板獲取困難導致的RNA提取量少或RNA質(zhì)量不佳，即使選用蕞佳的試劑、篩選出良好的引物，也有可能qPCR定量得到的內(nèi)參基因CT值在18-20個cycle，而目的基因在31-35個循環(huán)。遇到這種情況，你是怎么解決的呢？qPCR在低豐度表達基因定量中的局限性基因的豐度是指基因在基因組中的拷貝數(shù)?？煞譃楦哓S度，中等豐度和低豐度。低豐度是指目的基因在基因組中的拷貝數(shù)低,可簡單
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小翊君前幾期一直在和大家聊qPCR，今天我們開啟一個新的話題，聊一聊反轉(zhuǎn)錄。反轉(zhuǎn)錄（reversetranscription）定義:反轉(zhuǎn)錄過程簡單來說是以RNA為模板合成DNA的過程，是對中心法則的重要修正和補充。中心法則通常會出現(xiàn)兩個不同的表述，逆轉(zhuǎn)錄和反轉(zhuǎn)錄，二者的本質(zhì)區(qū)別在于：反轉(zhuǎn)錄是在研究過程中人為提取RNA并以之為模板人工合成DNA的過程。逆轉(zhuǎn)錄是RNA病毒自主行為，以RNA為模板形成DNA的過程。前者發(fā)生在體外，后者發(fā)生在體內(nèi)。反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)的示意圖如下圖所示：反轉(zhuǎn)錄實驗過程看似簡單的反
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牛血清白蛋白、免疫球蛋白G（IgG）、牛凝血酶、轉(zhuǎn)鐵蛋白、胰島素、封閉血清和低密度脂蛋白YEASEN（翊圣生物）致力于為診斷試劑公司和廣大科研用戶提供高品質(zhì)的牛血清白蛋白、免疫球蛋白G（IgG）、牛凝血酶、轉(zhuǎn)鐵蛋白、胰島素、封閉血清和低密度脂蛋白，系列產(chǎn)品如下：（一）牛血清白蛋白（BSA）牛血清白蛋白（BovineSerumAlbumin,BSA）是牛血清中的一種球蛋白，又稱第五組分（需要注意的是，第五組分并不是BSA的一種組份，而是EdwinJ.Cohn教授早期從血液中通過特定的分離技術(shù)得到5
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qPCR進階攻略——帶你玩轉(zhuǎn)儀器設(shè)置！
熒光定量PCR實驗是分子實驗室常用的一項技術(shù)。持續(xù)關(guān)注小翊的應(yīng)該都掌握了高質(zhì)量cDNA的獲取方法，引物設(shè)計指南以及反應(yīng)體系的配制技巧（還未get的小伙伴戳文末鏈接），然而上機時，發(fā)現(xiàn)和別人的反應(yīng)條件不一致卻又不敢動儀器？本期小翊將帶你玩轉(zhuǎn)qPCR儀器的設(shè)置！目前市面上的qPCR儀器種類五花八門，但基本上儀器的設(shè)置都相對一致。我們以ABI7500為例進行介紹。反應(yīng)板設(shè)置實驗目的選擇：我們將實驗命名為“Yeasen”，進行“Quantitation：ΔΔCt”實驗。實驗方法選擇：如選用SYBRGre -
實驗室常用到的實驗：逆轉(zhuǎn)錄實驗實驗人員通過體外模擬病毒復制過程，以提取的RNA為模板，使用逆轉(zhuǎn)錄酶催化，合成出與RNA互補的cDNA鏈。終構(gòu)建cDNA文庫，并從中篩選所需的靶標基因。BUT！小伙伴們做逆轉(zhuǎn)錄實驗時，1）有沒有深究過RNA逆轉(zhuǎn)錄出的cDNA能不能真實反映出基因表達信息？2）做實驗時，有沒有發(fā)生過內(nèi)參做的很好，目的基因做不出的情況？如果有發(fā)生上述情況，那么需要重新評估逆轉(zhuǎn)錄實驗結(jié)果的有效性。逆轉(zhuǎn)錄結(jié)果有效性的評定逆轉(zhuǎn)錄實驗結(jié)果有效性的評定重要的是盡可能反映樣本中原始RNA模板的信息，
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HB190313測序數(shù)據(jù)不好？是不是建庫出了問題？！——從測序數(shù)據(jù)看文庫構(gòu)建高通量測序中的文庫構(gòu)建指的是在DNA兩端連接特定的接頭從而使其符合測序平臺要求的過程，在高通量測序過程中，文庫質(zhì)量直接影響終測序數(shù)據(jù)的質(zhì)量，打個比方，如果文庫上機測序的濃度很低，樣本在FlowCell上擴增所形成的DNA樣本簇就會很少，測序數(shù)據(jù)量也將減少，這就可能導致測序失敗，所以我們說文庫的質(zhì)量控制和質(zhì)量評估也是NGS中的關(guān)鍵步驟。文庫如何質(zhì)控？評估文庫質(zhì)量的方法有哪些？n文庫質(zhì)控：文庫在上機之前都有會進行質(zhì)量檢測，質(zhì)
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這有一份FFPE樣本建庫的檔案，還不趕緊Pick?什么是FFPE？FFPE（Formalin-FixedａndParrffinEmbedded），即福爾馬林固定石蠟包埋樣本。由于這種處理方法能夠較長時間地保存組織或制備檢驗所需的組織標本，所以在臨床病理檢驗、腫瘤基因檢測中應(yīng)用廣泛。在世界范圍內(nèi)，大約有數(shù)十億份組織樣品保存在醫(yī)院或者組織樣品庫中，其中絕大多數(shù)是使用福爾馬林固定石蠟包埋的方法處理的樣品。FFPE樣本通常代表了珍貴且來源廣泛的生物醫(yī)學研究材料，為闡明疾病機制、回顧性研究等提供了寶貴的資
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系統(tǒng)介紹鏈脲佐菌素（STZ）誘導的糖尿病疾病模型
翊圣生物提供高成功率糖尿病建模用STZ：純度≥98%（HPLC測定）。產(chǎn)品名稱貨號規(guī)格*（元）Streptozocin鏈脲佐菌素60256ES60100mg156.00Streptozocin鏈脲佐菌素60256ES76500mg386.00Streptozocin鏈脲佐菌素60256ES801g676.00文章包含以下知識點1.STZ誘導糖尿病模型的構(gòu)建標準SOP2.STZ誘導糖尿病模型建模效果評估指標3.STZ誘導糖尿病模型的失敗原因解析4.STZ誘導小/大鼠死亡率高的原因解析5.糖尿病建模
